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[发明专利]一种蛋白印记膜再生液的制备方法-CN202111168748.9在审
发明人：薛帮凯;樊菲;杨召军;田艳维;王硕;王立东 -专利权人：天津津科生物科技有限责任公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2021-12-03 - 主分类号： G01N33/53 文献下载
摘要：本发明涉及分子印迹技术领域，具体涉及一种蛋白印记膜再生液的制备方法，采用盐酸胍处理蛋白酶K溶液，得到处理后蛋白酶K溶液；将低活性蛋白酶K与复合盐溶液混合配置，调节pH值，得到蛋白印迹膜再生液，蛋白酶K能够将蛋白酶解成小片段多肽，从而使模板蛋白更容易从孔穴中洗脱出来，达到比较好的洗脱效果，通过盐酸胍处理蛋白酶K溶液能够使蛋白酶K进行一定程度上的去折叠，蛋白酶K的活力与构象具有较强的相关性，通过诱导蛋白酶K进行去折叠处理，能够降低蛋白酶K的活性，从而保障洗脱后留下较多的有效识别位点，从而能够直接进行其他蛋白的检测，本发明具有比较好的效果和洗脱效率。
一种蛋白印记再生制备方法

[发明专利]重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK-M1及制备方法-CN201811234322.7有效
发明人：岳敏;李民强 -专利权人：大连博格林生物科技有限公司
申请日： 2018-10-23 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明公开一种重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK‑M1及其制备方法，本发明从改造重组布氏白僵菌的蛋白酶K分子结构入手，得到活性和稳定性均提高的蛋白酶K突变体PK‑M1，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；优化表达系统，利用酵母细胞外分泌表达技术，可大规模发酵高效表达重组蛋白酶K突变体，进一步提高蛋白酶K产量；采用高效亲和层析的蛋白纯化方式，提高蛋白酶K纯化过程中的收率，实现了蛋白酶K的规模化生产。
重组布氏白僵菌蛋白酶突变体 pk m1 制备方法

[发明专利]重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK-M2及制备方法-CN201811234362.1有效
发明人：岳敏;李民强 -专利权人：大连博格林生物科技有限公司
申请日： 2018-10-23 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明公开一种重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK‑M2及其制备方法，本发明从改造重组布氏白僵菌的蛋白酶K分子结构入手，得到活性和稳定性均提高的蛋白酶K突变体PK‑M2，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；优化表达系统，利用酵母细胞外分泌表达技术，可大规模发酵高效表达重组蛋白酶K突变体，进一步提高蛋白酶K产量；采用高效亲和层析的蛋白纯化方式，提高蛋白酶K纯化过程中的收率，实现了蛋白酶K的规模化生产。
重组布氏白僵菌蛋白酶突变体 pk m2 制备方法

[发明专利]重组表达具有明胶酶活性p37k蛋白酶的方法及其提高p37k蛋白酶性能的方法-CN202210976243.3在审
发明人：侯勇;杨领振;夏庆友;王清浪;龚竞;程悦静 -专利权人：西南大学
申请日： 2022-08-15 - 公布日： 2023-03-03 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本发明公开了重组表达具有明胶酶活性p37k蛋白酶的方法及其提高p37k蛋白性能的方法，本发明通过Bac‑to‑Bac杆状病毒表达系统表达得到约40kD的重组蛋白，然后激活后获得分子量约为25kDa的p37k蛋白酶，25kDa的p37k蛋白酶具有明胶酶活性，但是重组表达的p37k蛋白酶的对热敏感，研究发现在p37k蛋白酶加入中肠提取物和金属离子能够提高重组表达的p37k蛋白酶的热稳定性，并且，加入E64能够提高重组表达的p37k明胶水解活性。因此，中肠提取物和金属离子能够作为p37k蛋白酶的热稳定性保护剂，E64能够作为p37k明胶水解活性的增强剂，为进一步拓展p37k蛋白酶条件提供了基础。
重组表达具有明胶活性 p37k 蛋白酶方法及其提高性能

[发明专利]一种组织蛋白酶K的制备方法-CN202210561354.8有效
发明人：张静静;王斌;安文琪;邢体坤;宋路萍 -专利权人：晟明生物技术（郑州）有限公司
申请日： 2022-05-23 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种组织蛋白酶K的制备方法。所述方法包括如下步骤：使融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达，得到所述组织蛋白酶K；所述融合蛋白为将PelB信号肽融合于组织蛋白酶K的N端后所得。本发明基于原核表达系统采用四种不同信号肽DsbA、OmpA、PelB和STII制备组织蛋白酶K，并通过对组织蛋白酶K表达量进行分析发现：PelB信号肽可以高效引导组织蛋白酶K分泌至周质空间，其表达量显著高于其它信号肽，是组织蛋白酶K周质空间分泌表达的最佳信号肽，不仅在组织蛋白酶K制品的表达和制备中具有良好的应用前景，还对开发组织蛋白酶K的单克隆抗体或小分子抑制剂及治疗骨质疏松症的药物研发具有重要意义。
一种组织蛋白酶制备方法

[发明专利]基因工程改造蛋白酶K及其生产方法-CN201410190299.1在审
发明人：赵旭 -专利权人：天津旭晨科技有限公司
申请日： 2014-05-07 - 公布日： 2015-11-25 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明公开了提供一种基因工程改造的蛋白酶K，其酶活性为同种天然蛋白酶活性2倍以上，能够将生产周期缩短至3～4天，极大的提高了生产效率。通过合成与扩增获得蛋白酶K基因，然后通过克隆，转化，将蛋白酶K基因整合到酵母染色体上，通过酵母的筛选，选出能够高效表达目标蛋白的优质菌株，利用高密度发酵技术，进行高密度发酵表达蛋白酶K，然后经过蛋白质的分离纯化，获得高纯度高活性蛋白酶K。
基因工程改造蛋白酶及其生产方法

[发明专利]高表达高比活蛋白酶K突变体序列、毕赤酵母表达质粒的构建及菌株筛选和纯化方法-CN202111419891.0在审
发明人：王宇丰;殷三福;万山青 -专利权人：河南合智医药科技有限公司
申请日： 2021-11-26 - 公布日： 2022-09-06 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本发明公开了蛋白酶K（Proteinase K）突变体的序列及其分泌表达的酵母菌株Proteinase K‑m/pGAPZα‑A/GS115构建的关键技术、构建结果及利用它来生产高活性蛋白酶K的纯化方法本发明采用基因工程表达的方法生产高活性的蛋白酶K突变体，比活性达到26.8国际单位/毫克，表达量达到366.7毫克/升蛋白，通过纯化可获得纯度达95%以上的目标蛋白蛋白酶K，为蛋白酶K今后的推广使用奠定良好基础
表达蛋白酶突变体序列酵母质粒构建菌株筛选纯化方法

[发明专利]一种重组蛋白酶K工业化纯化及冻干方法-CN202010960308.6在审
发明人：占全;杨代常 -专利权人：武汉禾元生物科技股份有限公司
申请日： 2020-09-14 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组蛋白酶K工业化纯化及冻干方法。将毕赤酵母表达的重组蛋白酶K发酵液澄清过滤后加入稀释液稀释，并经过超滤步骤进行浓缩和透析，获得含微量金属离子和色素的蛋白酶K透析液，将该透析液经过阳离子交换层析分离纯化，获得含重组蛋白酶K的洗脱液；将含重组蛋白酶K的洗脱液放在室温结晶沉淀4‑6h，搅拌混匀后倒入正压过滤装置中，压滤获得蛋白酶K滤饼；该滤饼复溶后，加入冻干赋形剂，按照优化的冻干工艺进行冻干，分包装后获得蛋白酶K成品。所获得的蛋白酶K目标物产量高、活性好。
一种重组蛋白酶工业化纯化方法

[发明专利]一种重组布氏白僵菌蛋白酶K及其工业化生产与纯化方法-CN201410472748.1有效
发明人：丁海平;李坤;梁良 -专利权人：合肥巅峰生物科技有限公司
申请日： 2014-09-16 - 公布日： 2018-06-08 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组布氏白僵菌蛋白酶K及其工业化生产与纯化方法，涉及基因改造和蛋白质工程技术领域，通过生物信息手段得到适于毕赤酵母重组表达的重组白僵菌蛋白酶K编码基因，合成该优化基因并在真核系统表达成功，得到了酶活明显大于传统林伯氏白色念球菌蛋白酶K的重组蛋白酶K，并提供了该重组白僵菌蛋白酶K的工业化生产与纯化方法。本发明通过化学合成该编码基因并构建GS115/pPIC9K‑ProK高产工程菌，克服了天然产品产量低、费用高的缺陷，并显著降低了相关产业的蛋白酶K使用成本，具有广泛的应用前景。
蛋白酶K 布氏白僵菌编码基因白僵菌蛋白质工程技术白色念球菌重组蛋白酶毕赤酵母化学合成基因改造生物信息天然产品优化基因重组表达工程菌构建酶活真核合成高产应用成功

[发明专利]一种胰蛋白酶抗性改良的脂肪酶突变体及其基因和应用-CN201710441642.9有效
发明人：张会图;路福平;张莹;孙同韦 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2017-06-13 - 公布日： 2020-04-21 - 主分类号： C12N9/20 文献下载
摘要：本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体内容涉及一种对胰蛋白酶抗性改良的脂肪酶lipY2‑m突变体K36G/K39T、R63G和K36G/K39T/R63G及其基因和应用。本发明的三个突变体的胰蛋白酶抗性均有明显提高，经相同浓度的胰蛋白酶处理后，lipY2‑m的抗胰蛋白酶半衰期为41.5min，K36G/K39T的抗胰蛋白酶半衰期为43.9min；R63G的抗胰蛋白酶半衰期为45.7min；组合突变体K36G/K39T/R63G的抗胰蛋白酶半衰期为46.8min，对胰蛋白酶抗性的半衰期分别提高了5.8％、10.1％和12％，显示出了在治疗胰腺功能不全等疾病方面的潜在应用价值
一种胰蛋白酶抗性改良脂肪酶突变体及其基因应用

[发明专利]一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法-CN202011480855.0在审
发明人：翟留伟;其他发明人请求不公开姓名 -专利权人：深圳市帝迈生物技术有限公司
申请日： 2020-12-15 - 公布日： 2022-06-17 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本申请涉及生物技术领域，具体公开了一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法，该核酸提取试剂盒包括：裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉、漂洗缓冲液、洗脱液以及磁珠吸附液；蛋白酶K冻干粉包括：MOPSO、蛋白酶K、防腐剂通过上述方式，核酸提取试剂盒中蛋白酶K的剂型为冻干粉，可在室温下长期稳定储存，从而克服了已有蛋白酶K溶液存在的缺点。
一种核酸提取试剂盒以及方法

[发明专利]一种生产重组蛋白酶K的方法-CN202011639034.7在审
发明人：汪本助;徐斌;王舒 -专利权人：安徽丰原发酵技术工程研究有限公司
申请日： 2020-12-31 - 公布日： 2021-04-02 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及蛋白酶K的重组表达载体、具有所述重组表达载体的宿主细胞以及生产重组蛋白酶K的方法。本发明通过设计表达载体，实现重蛋白酶K的高效表达，再采用优化的纯化方法对目标蛋白进行提纯，大幅缩短了目标蛋白的纯化流程与纯化时间，同时提高了目标蛋白的纯度、得率和酶活，节省实验步骤并减少成本。本发明为研发与生产蛋白酶K类似的或者其他蛋白类工具酶奠定了基础。
一种生产重组蛋白酶方法

[发明专利]具有降低吸附作用提高水解作用的蛋白酶K变异体-CN96193792.0无效
发明人： P·F·布罗德三世;B·L·巴尔内特;D·N·鲁宾 -专利权人：普罗格特－甘布尔公司
申请日： 1996-03-06 - 公布日： 1998-06-03 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明涉及蛋白酶K的变异体,它们对野生型蛋白酶K的氨基酸序列进行了改良,野生型氨基酸序列包含第一环区、第二环区、第三环区、第四环区、第五环区和第六环区;其中改良的氨基酸序列是在一个或多个环区的特定位置上含有与野生型蛋白酶K不同的氨基酸(即替换),因此,与野生型蛋白酶K相比,蛋白酶K变异体降低了对不溶底物的吸附作用,并提高了对不溶底物的水解作用。本发明也涉及编码这些蛋白酶K变异体的DNA序列。本发明还涉及包含这些蛋白酶K变异体的用于清洁多种表面的组合物。
具有降低吸附作用提高水解蛋白酶异体

[实用新型]一种荚膜多糖疫苗蛋白核酸去除装置-CN201821868085.5有效
发明人：朱希灿 -专利权人：比欧泰克生物技术服务(北京)有限公司
申请日： 2018-11-13 - 公布日： 2019-08-09 - 主分类号： C12M1/40 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种荚膜多糖疫苗蛋白核酸去除装置，包括相互串联的核酸酶反应器、蛋白酶K反应器和中空纤维柱，所述核酸酶反应器的顶部连接有进液两路四口阀，核酸酶反应器的侧壁上安装有与内腔相通的填料进口，所述蛋白酶K反应器的底部连接有放液两路四口阀，蛋白酶K反应器的侧壁上安装有与内腔相通蛋白酶K填料进口。本荚膜多糖疫苗蛋白核酸去除装置，初步纯化的荚膜粗糖消化成小分子寡核苷酸；串联进入蛋白酶K反应器，蛋白酶K分解消化为小分子氨基酸，消化成氨基酸多肽片段；在荚膜多糖大分子超滤浓缩的同时，分解成小分子氨基酸、寡核苷酸片段，分离并排出，解决了核酸酶/蛋白酶K残留，多糖疫苗浓缩与核酸、蛋白分离的难题。
反应器蛋白酶K 荚膜多糖核酸酶核酸去除疫苗蛋白小分子氨基酸内腔相通填料进口侧壁两路串联寡核苷酸片段氨基酸多肽本实用新型中空纤维柱分解消化超滤浓缩初步纯化蛋白分离底部连接多糖疫苗寡核苷酸糖消化小分子核酸放液荚膜进液残留浓缩

[发明专利]一种含有萘醌和菲醌结构的组织蛋白酶K抑制剂及其组合物和应用-CN202011153094.8在审
发明人：薛黎明;蒋益萍;卢大胜;汪国权;金玉娥;冯超;徐佳乐 -专利权人：上海市疾病预防控制中心
申请日： 2020-10-27 - 公布日： 2021-02-02 - 主分类号： A61K45/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种含有萘醌和菲醌结构的组织蛋白酶K抑制剂及其组合物和用途，所述抑制剂用于制备以组织蛋白酶K为靶标的疾病的药物，所述化合物作用于组织蛋白酶K活性位点，具有显著抑制酶底物胶原降解活性或抑制弹性纤维蛋白降解活性或抑制甲状腺球蛋白降解活性，可用于制备治疗以组织蛋白酶K异常表达或活化为特征的疾病，包括甲状腺疾病、心血管疾病和骨疾病，具体为甲状腺功能亢进、骨质疏松、牙龈病(牙龈炎和牙周炎)、类风湿性关节炎等。研究证实β‑拉帕醌显著抑制组织蛋白酶K底物胶原、弹性纤维和甲状腺球蛋白的降解；四烯甲萘醌和七烯甲萘醌与组织蛋白酶K分子作用强，能显著抑制组织蛋白酶K与底物胶原纤维的结合，抑制胶原降解。
一种含有结构组织蛋白酶抑制剂及其组合应用

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